无义介导的mRNA降解验证实验（NMD）
发布时间：
2023/10/20 14:55
无论是外显子产生的终止密码子突变还是mRNA异常剪接后产生的终止密码子突变，都有可能会被RNA监测机制识别并降解，mRNA 降解途径是在细胞中调节基因表达的一个重要步骤，翻译 mRNA 监视主要有三种形式: nonsense-mediated decay (NMD), no-go decay (NGD) 和 nonstop decay (NSD)，只要是提前产生了PTC都有必要考虑NMD降解。
验证NMD降解途径目前主要有敲低/敲除UPF1后的回复实验，CHX放线菌酮实验，添加NMD抑制剂实验，海创科业开发了一种极其简单的工具方法适用于绝大多数剪接突变，终止突变和移码终止突变，通过RNA剪接的EJC标记，屏蔽NMD识别标记物，只需要通过2套质粒即可验证RNA的剪接，蛋白的翻译问题，将从mRNA水平和蛋白水平两方面来论证，我们可以共同讨论选择实验方案来完成您的研究。
服务流程
价格及周期
| 服务类型 |
价格/元 |
周期 |
备注 |
| NMD降解验证 |
评估报价 |
评估 |
|
客户提供
- 基因突变位点信息，定位转录本号，样本合子类型
- 携带突变的DNA或者血样，DNA要求浓度大于30ng/ul，体积大于20ul，血样要求大于0.5ml（可选，提供与否都可以开展实验，价格不变）
交付标准
- 构建好的minigene质粒（Wild type / Mutant type)
- 相关测序结果
- Western blot相关数据
- qRT-PCR相关数据
- 实验报告（包括实验方法，原始图具，分析结果等）
技术原理（示例）
实验例
| 样品名 |
质粒描述 |
使用细胞 |
是否可以被NMD识别 |
| Wild type1 |
野生型对照质粒 |
293T |
是 |
| Mutant type1 |
剪接突变质粒 |
293T |
是 |
| Wild type2 |
野生型对照质粒 |
293T |
否 |
| Mutant type2 |
剪接突变质粒 |
293T |
否 |
A：RT-PCR剪接电泳图，突变造成了外显子的片段缺失；
B：剪接示意图；
C：EGFP荧光图片，突变导致蛋白翻译的降低；
D：Western blot验证蛋白表达；
E：mRNA相对表达量；
F：蛋白相对表达量
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